TRβ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401467-ACT

THRB kodiert den Thyreoidhormonrezeptor Beta (TRβ), einen ligandabhängigen nukleären Rezeptor, der Triiodthyronin (T3) bindet und die Transkription über Thyreoidhormon-Response-Elemente reguliert. TRβ koordiniert über Interaktionen mit Koregulatoren sowie Crosstalk mit RXR- und MAPK/PI3K-Signalwegen Genprogramme, die den zellulären Stoffwechsel, die Mitochondrienfunktion, die Lipid- und Kohlenhydrat-Homöostase sowie die entwicklungsabhängige Differenzierung steuern. Eine veränderte THRB-Aktivität wird mit einer gestörten endokrinen Signalübertragung und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, und Störungen in TRβ-vermittelten Transkriptionsnetzwerken werden u. a. im Kontext der Schilddrüsenhormonresistenz und hormonresponsiver Krebserkrankungen untersucht. In menschlichen Zellen dient TRβ als Modell-Transkriptionsfaktor, um die Chromatinbelegung nukleärer Rezeptoren, die Abhängigkeit von Kofaktoren und die stimulusabhängige Genregulation zu untersuchen.

TRβ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen THRB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRβ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des THRB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der THRB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRβ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native THRB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRβ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRβ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem THRB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.