Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRβ: sc-401467-ACT

THRB code le récepteur bêta des hormones thyroïdiennes (TRβ), un récepteur nucléaire dépendant d’un ligand qui se lie à la triiodothyronine (T3) et régule la transcription via des éléments de réponse aux hormones thyroïdiennes. TRβ coordonne des programmes géniques contrôlant le métabolisme cellulaire, la fonction mitochondriale, l’homéostasie des lipides et des glucides, ainsi que la différenciation au cours du développement, grâce à des interactions avec des corégulateurs et à une communication croisée avec RXR et les voies de signalisation MAPK/PI3K. Une activité altérée de THRB est associée à une dérégulation de la signalisation endocrinienne et à des phénotypes métaboliques, et les perturbations des réseaux transcriptionnels médiés par TRβ sont étudiées dans des contextes tels que la résistance aux hormones thyroïdiennes et les cancers hormono-dépendants. Dans les cellules humaines, TRβ sert de facteur de transcription modèle pour étudier l’occupation de la chromatine par les récepteurs nucléaires, la dépendance aux cofacteurs et la régulation génique sensible aux stimuli.

TRβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de THRB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus THRB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription THRB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus THRB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRβ dans les cellules tumorales présentant une expression de THRB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.