TPPII Plasmide Double Nickase (m): sc-423485-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TPPII Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TPPII Double Nickase Plasmid (m) e il TPPII Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tpp2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TPPII Plasmide Double Nickase (m) | sc-423485-NIC | 20 µg | $410.00 |
Tpp2 codifica la tripeptidil peptidasi II (TPPII), una grande esopeptidasi citosolica che rifinisce gli oligopeptidi generati dal proteasoma e contribuisce al turnover delle proteine intracellulari e all’omeostasi degli amminoacidi. L’attività di TPPII si integra con le reti di proteostasi, inclusi il processamento tramite ubiquitina–proteasoma, le risposte cellulari allo stress e la gestione dei peptidi rilevante per le vie di processamento e presentazione dell’antigene. Modellando i pool peptidici e sostenendo il controllo qualità proteico, TPPII può influenzare la crescita cellulare, la segnalazione di sopravvivenza e le risposte allo stress proteotossico. Vie di proteasi e di proteostasi deregolate che coinvolgono TPPII sono spesso studiate in modelli di infiammazione, funzione immunitaria e disturbi caratterizzati da un’alterata degradazione proteica.
TPPII Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tpp2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tpp2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tpp2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tpp2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.