TorsinA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424414

Übersicht

Tor1a kodiert TorsinA, eine AAA+-ATPase, die im endoplasmatischen Retikulum und an der Kernhülle lokalisiert ist und dort über Interaktionen mit LAP1 und LULL1 zur Integrität der Kernhülle, zur Proteostase sowie zu membranassoziierten Umbauprozessen beiträgt. In Mauszellen ist die Aktivität von TorsinA mit der Regulation des nukleozytoplasmatischen Transports, mit Stressantworten des endoplasmatischen Retikulums und mit der Qualitätskontrolle fehlgefalteter Proteine verknüpft. Eine Störung der TOR1A-Funktion wird mit neuronaler Dysfunktion und dystonieassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was das Gen für Studien zur Biologie motorischer Schaltkreise und zur zellulären Anpassung an Stress relevant macht. Tor1a wird außerdem als Modell-Locus genutzt, um zu untersuchen, wie Störungen der Kernhülle die Kopplung an das Zytoskelett und den intrazellulären Transport beeinflussen.

Das TorsinA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tor1a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tor1a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tor1a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TorsinA-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tor1a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TorsinA-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tor1a-Exone abzielen, die für die TorsinA-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tor1a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TorsinA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TorsinA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tor1a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TorsinA HDR-Plasmid (m) und TorsinA HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tor1a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tor1a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.