Plasmide Double Nickase (h) TNAP: sc-400784-NIC

ALPL code la phosphatase alcaline non spécifique des tissus (TNAP), une ectoenzyme ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui hydrolyse les monoesters de phosphate extracellulaires afin de réguler l’équilibre entre phosphate inorganique et pyrophosphate. En dégradant le pyrophosphate, la TNAP module les processus de minéralisation et favorise la maturation correcte de la matrice osseuse et dentaire, tout en influençant la signalisation purinergique via la déphosphorylation des nucléotides dans le milieu extracellulaire. L’activité d’ALPL/TNAP s’inscrit au carrefour de voies contrôlant l’homéostasie du phosphate et la calcification de la matrice extracellulaire, et une altération de sa fonction est associée à l’hypophosphatasie ainsi qu’à des phénotypes de calcification pathologique. En tant qu’enzyme exposée à la surface cellulaire avec une activité catalytique mesurable, la TNAP constitue une cible aisément exploitable pour étudier les relations génotype‑phénotype dans le métabolisme minéral et des modèles de différenciation cellulaire.

TNAP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALPL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALPL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALPL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALPL.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.