TMPRSS11D Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407568-ACT

TMPRSS11D codifica una proteasi serinica transmembrana di tipo II espressa prevalentemente nei tessuti epiteliali, dove contribuisce alla proteolisi pericellulare sulla superficie cellulare. Scindendo substrati extracellulari o associati alla membrana, TMPRSS11D può influenzare la differenziazione epiteliale, il rimodellamento della barriera e le vie di segnalazione attivate da proteasi che modulano le risposte infiammatorie e l’omeostasi tissutale. Un’attività o un’espressione deregolate delle proteasi seriniche ancorate alla membrana sono state associate a un’alterata integrità mucosale e a programmi di rimodellamento anomali osservati nelle patologie croniche delle vie aeree e del tratto aero-digestivo superiore. TMPRSS11D rappresenta pertanto un bersaglio utile per studiare la regolazione, dipendente da proteasi, dei microambienti epiteliali e programmi trascrizionali specifici di contesto nelle cellule umane.

TMPRSS11D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TMPRSS11D senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TMPRSS11D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TMPRSS11D nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TMPRSS11D, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TMPRSS11D. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TMPRSS11D nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TMPRSS11D nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TMPRSS11D nelle cellule tumorali con espressione di TMPRSS11D silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.