TMEM43 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402764-ACT

TMEM43（transmembrane protein 43、膜貫通タンパク質43。LUMAとしても知られる）は核内膜に存在するタンパク質で、核ラミナと会合し、核膜の構築、メカノトランスダクション、ならびに核構造の維持に寄与します。ラミンや他の核膜構成因子と相互作用することで、TMEM43はクロマチンの配置や、細胞分化およびストレス応答に関連する遺伝子制御プログラムに影響を与えます。TMEM43機能の異常は、不整脈原性心筋症を含む心臓および神経筋の表現型と関連づけられており、核膜関連疾患の機序を研究するうえで重要な分子であることが示されています。ヒト細胞モデルでは、TMEM43の撹乱（機能改変）は、核構造・転写制御・細胞状態の安定性の結びつきを調べるためにしばしば用いられます。

TMEM43 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEM43の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMEM43 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMEM43 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEM43転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMEM43の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEM43遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMEM43依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEM43発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMEM43経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。