TLR5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401154-ACT

Humanes TLR5 kodiert den Toll-like-Rezeptor 5, einen Mustererkennungsrezeptor, der bakterielles Flagellin erkennt und an der Plasmamembran die angeborene Immun-Signalübertragung initiiert. Nach Ligandenbindung signalisiert TLR5 hauptsächlich über die MYD88-abhängige Achse und aktiviert NF-κB- und MAPK-Signalwege. Dadurch wird die Transkription proinflammatorischer Zytokine und Chemokine gefördert, die mukosale und systemische Immunantworten prägen. Die Aktivität von TLR5 beeinflusst die Funktion der epithelialen Barriere und die Interaktionen zwischen Wirt und Mikrobiom; veränderte Signalübertragung wurde mit entzündlichen Phänotypen und einer erhöhten Infektanfälligkeit in Verbindung gebracht. Aufgrund seiner zentralen Rolle bei der Erkennung von Pathogenen und der Steuerung des Immuntonus wird TLR5 häufig in der Immunologie, Mikrobiologie sowie in entzündungsorientierten Zellmodellen untersucht.

TLR5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TLR5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TLR5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TLR5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TLR5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TLR5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TLR5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TLR5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TLR5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TLR5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.