TLR3 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-400512-LAC-2

Das humane TLR3 (Toll-like Receptor 3) kodiert einen endosomalen Mustererkennungsrezeptor, der virale doppelsträngige RNA sowie das synthetische Analogon Poly(I:C) detektiert und darüber eine angeborene Immunantwort einleitet, indem er über den Adapter TRIF Signale weiterleitet, IRF3/IRF7 und NF-κB aktiviert und die Induktion von Typ-I-Interferonen sowie proinflammatorischen Zytokinen auslöst. Die TLR3-Aktivität ist mit antiviralen Restriktionsprogrammen, der Reifung dendritischer Zellen und entzündlichen transkriptionellen Netzwerken verknüpft und kann unter bestimmten Stressbedingungen zudem Zelltodprogramme modulieren. Genetische Varianten oder eine dysregulierte TLR3-Signalgebung wurden mit einer veränderten Anfälligkeit für Virusinfektionen und mit immunvermittelten entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht, was TLR3 für Studien zu Wirt–Pathogen-Interaktionen, Interferonbiologie und Neuroinflammation relevant macht. Die Geneditierung von TLR3 ermöglicht die mechanistische Aufklärung der endosomalen Nukleinsäuresensorik, der Signalweg-Kreuzkommunikation mit der RIG-I/MDA5-Signalgebung sowie funktionelle Genomik-Screens in Immun- und Epithelmodellen.

TLR3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TLR3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TLR3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TLR3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TLR3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TLR3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.