TIS11D CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405406-ACT

ZFP36L2 kodiert das menschliche RNA-bindende Protein TIS11D, ein Mitglied der Tristetraprolin-Familie, das AU-reiche Elemente in Ziel-mRNAs erkennt und die Deadenylierung sowie den Abbau von Transkripten fördert. Durch posttranskriptionelle Kontrolle moduliert TIS11D Programme, die an der Lymphozytenentwicklung, zellulären Aktivierung und Differenzierung beteiligt sind, und integriert sich in entzündungs- und stressresponsive Signalnetzwerke, um die Dynamik der Genexpression zu prägen. Eine veränderte ZFP36L2-Aktivität wurde mit einer gestörten Immunhomöostase und abweichender Proliferation in Verbindung gebracht, die durch Fehlregulation von Zytokin- und zellzyklusbezogenen Transkripten entsteht, was seine Relevanz für die Immunologie und die Forschung zu hämatologischen Erkrankungen unterstreicht. Als Regulator der mRNA-Stabilität stellt TIS11D einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um RNA-Turnover, Transkriptom-Remodeling und die Festlegung von Zellschicksalen zu erforschen.

TIS11D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZFP36L2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TIS11D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZFP36L2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZFP36L2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TIS11D-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZFP36L2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TIS11D-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TIS11D-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZFP36L2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.