TIMP-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423403-ACT

O gene murino Timp2 codifica o inibidor tecidual de metaloproteinases-2 (TIMP-2), uma glicoproteína secretada que modula a renovação da matriz extracelular (MEC) ao inibir metaloproteinases de matriz e ao moldar a proteólise pericelular. Além da inibição ampla de MMPs, o TIMP-2 participa de complexos regulatórios da MMP2 e influencia a adesão e a migração celular, bem como a remodelação tecidual, por meio da sinalização MEC–integrina e da disponibilidade de fatores de crescimento. Esses processos são centrais para a angiogênese, a fibrose e a remodelação inflamatória, tornando o Timp2 um alvo frequentemente estudado em modelos de reparo de feridas e de desregulação da matriz específica de órgãos. A atividade alterada do TIMP-2 é comumente associada a mudanças no potencial de invasão e na formação do nicho metastático em estudos de biologia do câncer, sem implicar desfechos clínicos.

TIMP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Timp2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TIMP-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Timp2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Timp2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TIMP-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Timp2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TIMP-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TIMP-2 em células tumorais com expressão de Timp2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.