TIMP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423402-ACT

O gene Timp1 de camundongo codifica o inibidor tecidual de metaloproteinases-1 (TIMP-1), uma glicoproteína secretada que se liga e inibe múltiplas metaloproteinases de matriz (MMPs) para regular a renovação da matriz extracelular e a proteólise pericelular. Ao controlar a atividade das MMPs, o TIMP-1 influencia a adesão e a migração celular, bem como processos de remodelação tecidual que se interligam com a sinalização inflamatória e programas de reparo de feridas. A atividade do TIMP-1 é comumente estudada em contextos de fibrose, inflamação crônica e remodelação do microambiente tumoral, nos quais um desequilíbrio entre proteases e inibidores contribui para deposição desregulada de matriz e invasão celular. Como regulador extracelular multifuncional, o TIMP-1 também subsidia estudos mecanísticos de angiogênese e da comunicação entre estroma e sistema imune em modelos murinos.

TIMP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Timp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TIMP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Timp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Timp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TIMP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Timp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TIMP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TIMP-1 em células tumorais com expressão de Timp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.