TIEG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402480

Übersicht

KLF10 kodiert TIEG1 (TGF‑β‑induzierbares Early‑Growth‑Response‑Protein 1), einen Krüppel‑ähnlichen Zinkfinger‑Transkriptionsfaktor, der die TGF‑β/SMAD‑Signalübertragung mit einer kontextabhängigen Kontrolle von Zellzyklusprogression, Differenzierung und Apoptose verknüpft. TIEG1 reguliert Transkriptionsprogramme, die an der Umbauprozessen der extrazellulären Matrix und der Festlegung von Zellschicksalen beteiligt sind, und kann in epithelialen, knöchernen und immunologischen Zellkontexten die Signalweg‑Kreuzregulation mit MAPK‑ und hormonellen Signalwegen modulieren. Eine veränderte KLF10/TIEG1‑Aktivität wurde mit fehlregulierten fibrotischen Antworten, aberranter Osteoblastenfunktion und Knochenremodellierung sowie mit Veränderungen in tumorsuppressiven transkriptionellen Netzwerken in Verbindung gebracht, was es für mechanistische Studien zur Kontrolle der Proliferation und zur Gewebehomöostase relevant macht. Seine Rolle als Frühantwortfaktor macht es zu einem nützlichen Knotenpunkt, um stimulusabhängige Genregulation und die Verschaltung nachgeschalteter Signalwege zu untersuchen.

Das TIEG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KLF10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KLF10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KLF10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TIEG1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KLF10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TIEG1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KLF10-Exone abzielen, die für die TIEG1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KLF10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TIEG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TIEG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KLF10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TIEG1 HDR-Plasmid (h) und TIEG1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KLF10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KLF10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.