TGFβ2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400496-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TGFβ2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TGFβ2 Double-Nickase-Plasmid (h) und TGFβ2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TGFB2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TGFβ2: sc-374659
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TGFβ2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400496-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TGFβ2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400496-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TGFB2 kodiert den Transforming Growth Factor beta 2 (TGFβ2), ein sezerniertes Zytokin, das über Serin/Threonin-Kinase-Rezeptoren vom Typ I/II signalisiert und sowohl die SMAD2/3-abhängige Transkription als auch nicht-kanonische Signalwege wie MAPK, PI3K/AKT und Rho-Familien-GTPasen aktiviert. TGFβ2 reguliert Zellproliferation, Differenzierung, Apoptose, Immunmodulation und den Umbau der extrazellulären Matrix und trägt damit zur Gewebeentwicklung und Homöostase bei. Eine fehlregulierte TGFB2/TGFβ2-Signalgebung wird mit veränderten epithelial-mesenchymalen Transitionen, fibroseassoziiertem Remodeling, angiogenen Programmen und Immunflucht-Phänotypen in unterschiedlichen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht. In der Krebsbiologie und der Regenerationsforschung wird TGFB2 häufig aufgrund seiner Rollen in der Kommunikation zwischen Stroma und Tumor, der Matrixablagerung und der Linienspezifizierung untersucht.
TGFβ2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TGFB2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TGFB2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TGFB2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TGFB2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.