Partículas Lentivirales de Activación (h) TET2: sc-400545-LAC

TET2 (translocación diez-once 2) es una dioxigenasa dependiente de Fe(II)/2-oxoglutarato que cataliza la oxidación de la 5-metilcitosina a 5-hidroximetilcitosina y a derivados oxidados posteriores, favoreciendo la desmetilación activa y pasiva del ADN. Al moldear los paisajes de metilación en CpG, TET2 influye en la actividad de los potenciadores (enhancers), en programas de transcripción específicos de linaje y en la accesibilidad de la cromatina en células hematopoyéticas e inmunitarias. La alteración de la regulación epigenética dependiente de TET2 se asocia estrechamente con cambios en la autorrenovación y la diferenciación, con mutaciones recurrentes observadas en neoplasias mieloides y en la hematopoyesis clonal. Estas características convierten a TET2 en un nodo clave para estudiar el control epigenético de la transcripción, los resultados de la señalización inflamatoria y las redes reguladoras de genes dependientes del contexto.

Las partículas de activación lentiviral TET2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TET2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TET2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TET2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TET2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TET2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.