Tenomodulin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401145-ACT

TNMD kodiert Tenomodulin, ein Typ‑II‑Transmembran‑Glykoprotein, das in Sehnen, Bändern und anderen dichten Bindegeweben angereichert ist, wo es die Homöostase der extrazellulären Matrix und die Gewebereifung unterstützt. Tenomodulin ist mit tenogenen Differenzierungsprogrammen assoziiert und trägt zur Regulation der Zelladhäsion, der Kollagenfibrillogenese sowie von Umbauprozessen bei, die mit TGF‑β‑vermittelter profibrotischer Signalgebung zusammenhängen. Eine veränderte TNMD‑Expression wurde mit beeinträchtigter Sehnenheilung, Tendinopathie und muskuloskelettaler Degeneration des Bindegewebes in Verbindung gebracht; zudem wird TNMD aufgrund der berichteten anti‑angiogenen Aktivität von Tenomodulin‑Domänen häufig gemeinsam mit angiogeneseassoziierten Signalwegen untersucht. Diese Eigenschaften machen TNMD zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Spezifizierung von Fibroblasten‑Linien, mechanotransduktionsnaher Umbauantworten und krankheitsrelevanter Matrixbiologie in humanen Zellmodellen.

Tenomodulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TNMD-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Tenomodulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TNMD-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TNMD-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Tenomodulin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TNMD-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Tenomodulin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Tenomodulin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TNMD-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.