TBX2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403078-ACT

TBX2 kodiert einen Transkriptionsfaktor der T-Box-Familie, der über eine konservierte T-Box-Domäne an DNA bindet, um Entwicklungs-Genprogramme und Zellschicksalsentscheidungen zu koordinieren. In menschlichen Zellen reguliert TBX2 transkriptionelle Netzwerke, die Proliferation, das Umgehen der Seneszenz und die Linienspezifizierung steuern, und es sind Funktionen bei der Modulation von Zellzyklusregulatoren sowie differenzierungsassoziierten Signalwegen beschrieben. Eine aberrante TBX2-Expression wurde in mehreren Gewebekontexten mit dysreguliertem Wachstum und veränderter Entwicklungsmusterbildung in Verbindung gebracht, was TBX2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle zellulärer Identität macht. Die experimentelle Manipulation von TBX2 unterstützt mechanistische Forschung zu onkogenen Transkriptionsprogrammen, epithelial–mesenchymalen Dynamiken und zur Wechselwirkung entwicklungsbiologischer Signalwege.

TBX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TBX2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TBX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TBX2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TBX2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TBX2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TBX2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TBX2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TBX2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TBX2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.