TBK1 Double Nickase Plasmid (m): sc-425191-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TBK1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TBK1 Double-Nickase-Plasmid (m) und TBK1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Tbk1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TBK1: sc-398366
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TBK1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425191-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TBK1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-425191-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse *Tbk1* kodiert die TANK-bindende Kinase 1 (TBK1), eine Serin/Threonin-Kinase, die angeborene Immun- und Stresssignale integriert, indem sie IRF3/IRF7 phosphoryliert und NF-κB-gekoppelte Transkriptionsprogramme moduliert. TBK1 wirkt nachgeschaltet von Signalwegen der Mustererkennungsrezeptoren, darunter cGAS–STING und RIG-I/MAVS, um Typ-I-Interferonantworten und die antivirale Abwehr anzutreiben; zudem ist sie über Adapterproteine wie OPTN und SQSTM1 an selektiver Autophagie und Mitophagie beteiligt. Neben der Wirtsabwehr beeinflusst TBK1-Signalgebung auch die metabolische Homöostase sowie entzündliche Signalnetzwerke, die häufig in Modellen für Neuroinflammation und Neurodegeneration untersucht werden. Eine fehlregulierte TBK1-Aktivität oder -Dosierung wurde mit immunbezogenen und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch *Tbk1* einen zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien in Maus-Zellen darstellt.
TBK1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Tbk1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Tbk1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Tbk1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Tbk1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.