TAP1 Double Nickase Plasmid (m): sc-423265-NIC

Mouse Tap1 kodiert den „Transporter associated with antigen processing 1“ (TAP1), eine Untereinheit der ATP-bindenden Cassette (ABC), die mit TAP2 ein Heterodimer bildet und proteasomen-abgeleitete Peptide aus dem Zytosol in das endoplasmatische Retikulum transloziert. Diese Peptidbereitstellung ist für die Beladung von MHC‑Klasse‑I‑Molekülen und die anschließende Antigenpräsentation an CD8+‑T‑Zellen erforderlich und verknüpft TAP1 mit zentralen Signal- und Überwachungswegen der adaptiven Immunität. Die TAP1-Aktivität steht im Schnittpunkt interferongetriebener inflammatorischer Signalgebung, der ER‑Qualitätskontrolle und der Immunoproteasom–MHC‑I‑Achse, die das zelluläre Immunopeptidom prägt. Eine veränderte TAP1-Funktion ist in krankheitsrelevanten Modellen mit verminderter MHC‑I‑Oberflächenexpression und Phänotypen der Immunflucht assoziiert und unterstützt mechanistische Studien in den Kontexten Immunologie, Infektion und Tumorbiologie.

TAP1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Tap1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Tap1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Tap1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Tap1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.