TALK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406360

Übersicht

KCNK16 kodiert TALK-1 (K2P16.1), einen Kaliumkanal mit zwei Porendomänen, der zur Hintergrundleitfähigkeit für K⁺ beiträgt und das Ruhemembranpotenzial in erregbaren und sekretorischen Zellen festlegt. Durch die Regulation der Membran-Erregbarkeit beeinflusst TALK-1 den spannungsabhängigen Ca²⁺-Einstrom sowie nachgeschaltete, Ca²⁺-gekoppelte Signalwege, die die Reiz‑Sekretions‑Kopplung und zelluläre Stressantworten prägen. Der Kanal ist in pankreatischen Inseln angereichert, wo ein veränderter K⁺-Fluss die elektrische Aktivität von β‑Zellen und die Dynamik der Insulinfreisetzung modulieren kann. Genetische und funktionelle Studien haben die Aktivität von KCNK16/TALK-1 mit metabolischen Merkmalen in Verbindung gebracht, was ihn für mechanistische Forschung zu diabetesassoziierter Signalgebung und zur Physiologie von Ionenkanälen relevant macht.

Das TALK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCNK16-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCNK16-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCNK16 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TALK-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCNK16-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TALK-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCNK16-Exone abzielen, die für die TALK-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCNK16-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TALK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TALK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCNK16-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TALK-1 HDR-Plasmid (h) und TALK-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCNK16-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCNK16-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.