Plásmido CRISPR de Activación (h) Talin: sc-400783-ACT

El gen humano TLN2 codifica la talina-2, un gran adaptador del citoesqueleto que conecta las colas citoplasmáticas de la integrina β con la F-actina, favoreciendo el ensamblaje de adhesiones focales y convirtiendo señales mecánicas en señales intracelulares. Al regular la activación de integrinas, la generación de fuerzas de tracción y el recambio de adhesiones, la talina-2 influye en la migración celular, la arquitectura tisular y vías mecanosensibles que convergen con la señalización de FAK/Src y de las GTPasas Rho. La actividad de TLN2 es especialmente relevante en contextos que requieren una adhesión sólida y una transmisión eficiente de fuerzas, incluyendo la biología muscular y cardíaca, y su desregulación se ha asociado con cambios en la motilidad celular y fenotipos invasivos en sistemas modelo de cáncer. Estas propiedades convierten a TLN2 en una diana útil para estudiar la señalización dependiente de adhesión, la remodelación del citoesqueleto y programas transcripcionales impulsados por la mecanotransducción.

Talin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TLN2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Talin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TLN2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TLN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Talin-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TLN2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Talin-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Talin-2 en células tumorales con expresión de TLN2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.