Talin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400783-ACT

O TLN2 humano codifica a talina-2, um grande adaptador do citoesqueleto que liga as caudas citoplasmáticas da integrina β à F-actina, promovendo a montagem de adesões focais e convertendo estímulos mecânicos em sinais intracelulares. Ao regular a ativação de integrinas, a geração de forças de tração e o turnover das adesões, a talina-2 influencia a migração celular, a arquitetura tecidual e vias mecanossensíveis que se cruzam com a sinalização de FAK/Src e de GTPases da família Rho. A atividade de TLN2 é particularmente relevante em contextos que exigem adesão robusta e transmissão de força, incluindo a biologia muscular e cardíaca, e sua desregulação tem sido associada a motilidade celular alterada e fenótipos invasivos em sistemas modelo de câncer. Essas propriedades tornam o TLN2 um alvo útil para estudar sinalização dependente de adesão, remodelamento do citoesqueleto e programas transcricionais impulsionados por mecanotransdução.

Talin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TLN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Talin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TLN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TLN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Talin-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TLN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Talin-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Talin-2 em células tumorais com expressão de TLN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.