Plasmide CRISPR d'Activation (h) Talin: sc-401342-ACT

Le gène humain **TLN1** code la taline, un adaptateur du cytosquelette qui relie les queues cytoplasmiques des **β‑intégrines** à la **F‑actine**, afin de favoriser l’activation des intégrines, l’assemblage des adhérences focales et la mécanotransduction. En coordination avec la **kinase d’adhérence focale (FAK)**, la signalisation de la famille **Src**, le remodelage de l’actine dépendant des **GTPases Rho** et les voies **PI3K–AKT**, la taline contribue à réguler l’adhésion, l’étalement, la migration et la survie cellulaires en réponse aux signaux de la matrice extracellulaire. Une expression altérée de **TLN1** ou des dynamiques d’adhésion dépendantes de la taline ont été associées à une invasion et un comportement métastatique dérégulés, ainsi qu’à des défauts d’hémostase et de trafic des cellules immunitaires qui dépendent de la signalisation des intégrines. Ces propriétés font de **TLN1** un nœud largement utilisé pour l’étude des réseaux de signalisation dépendants de l’adhésion et des interactions cellule–matrice sensibles aux forces.

Talin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TLN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Talin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TLN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TLN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Talin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TLN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Talin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Talin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TLN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.