Tak1 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-424044-LAC-2

Das Mausgen Map3k7 kodiert TAK1 (TGF-β–aktivierte Kinase 1), eine MAP3K, die Signale von TGF-β/BMP-Rezeptoren, Mitgliedern der TNF-Rezeptorsuperfamilie, Toll-like-Rezeptoren und IL-1-Rezeptorkomplexen integriert, um nachgeschaltete NF-κB- und MAPK-Kaskaden (JNK, p38 und ERK) zu aktivieren. Über die Phosphorylierung von MAP2Ks und des IKK-Komplexes über TAB-Adapter reguliert TAK1 inflammatorische und angeborene Immun-Signalwege, Stressantworten, Apoptose-/Überlebensentscheidungen sowie die Gewebehomöostase in zahlreichen Zelltypen. Eine fehlregulierte TAK1-Signalgebung wird mit aberranter Zytokinproduktion, beeinträchtigter Barriereintegrität und pathologischem Remodelling in Modellen entzündlicher Erkrankungen, Autoimmunität und krebsassoziierter Signalnetzwerke in Verbindung gebracht. Eine auf Map3k7 ausgerichtete Geneditierung unterstützt die mechanistische Analyse rezeptorproximaler Signalgebung, von Pathway-Crosstalk und zelltypspezifischen Phänotypen mittels Knockout/Knockin, Epitop-Tagging oder Störung der Kinasedomäne in Mauszellen und in vivo-Systemen.

Tak1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Map3k7-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Tak1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Map3k7-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Tak1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Map3k7-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.