TAF II p135 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404230-ACT

TAF4 codifica a TAF II p135, uma subunidade central do complexo TFIID que coordena o início da transcrição pela RNA polimerase II ao acoplar o reconhecimento do promotor à montagem do complexo de pré-iniciação. Por meio de interações com a TBP e outras TAFs, a TAF II p135 integra sinais mediados por ativadores com a maquinaria basal de transcrição para regular genes que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e programas responsivos ao estresse. Como parte do controle geral da transcrição, alterações na atividade de TAF4 podem remodelar o output transcricional global e impactar a proteostase e redes regulatórias associadas à cromatina. A desregulação de componentes do TFIID, incluindo TAF4, tem sido associada à reprogramação transcricional observada em distúrbios proliferativos e do desenvolvimento, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico em estudos de regulação gênica.

TAF II p135 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TAF4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAF II p135 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TAF4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TAF4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAF II p135. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TAF4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAF II p135 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAF II p135 em células tumorais com expressão de TAF4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.