Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
T-type Ca++ CP α1H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401147
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- T-type Ca++ CP α1H Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im T-type Ca++ CP α1H-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: T-type Ca++ CP α1H: sc-377510
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
T-type Ca++ CP α1H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401147 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CACNA1H kodiert die porenbildende α1H-Untereinheit des T‑Typ-Calciumkanals CaV3.2, der einen bei niedrigen Membranpotenzialen aktivierbaren Ca2+-Einstrom vermittelt und damit Membranexzitabilität, Schrittmacheraktivität sowie die calciumabhängige Genregulation prägt. Durch die Kontrolle unterschwelliger Oszillationen und intrazellulärer Ca2+-Transienten ist CaV3.2 in Signalprozesse eingebunden, die die Neurotransmitterfreisetzung, Hormonsekretion und aktivitätsabhängige Transkriptionsprogramme beeinflussen. Eine veränderte CACNA1H-Funktion wird mit Störungen der Erregbarkeit in Verbindung gebracht, darunter eine erhöhte Epilepsieanfälligkeit, Mechanismen neuropathischer Schmerzen und kardiale Rhythmusphänotypen, und wird zudem im Kontext von Tumorzellproliferation und -überleben untersucht. Als Knotenpunkt-Ionenkanal in exzitatorischen Signalnetzwerken wird CACNA1H häufig analysiert, um Ca2+-Einstrom-abhängige Signalwege und ein Remodeling des Channeloms zu untersuchen.
Das T-type Ca++ CP α1H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CACNA1H-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CACNA1H-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CACNA1H nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die T-type Ca++ CP α1H-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CACNA1H-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der T-type Ca++ CP α1H-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CACNA1H-Exone abzielen, die für die T-type Ca++ CP α1H-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CACNA1H-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom T-type Ca++ CP α1H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom T-type Ca++ CP α1H CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CACNA1H-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das T-type Ca++ CP α1H HDR-Plasmid (h) und T-type Ca++ CP α1H HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CACNA1H-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CACNA1H-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.