Tβ-4 Y-linked Double Nickase Plasmid (h): sc-418116-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Tβ-4 Y-linked Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Tβ-4 Y-linked Double-Nickase-Plasmid (h) und Tβ-4 Y-linked Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TMSB4Y abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Tβ-4 Y-linked Double Nickase Plasmid (h) | sc-418116-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Tβ-4 Y-linked Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418116-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TMSB4Y kodiert Thymosin beta-4 (Y-chromosomal), ein kleines, Actin-bindendes Peptid, das G-Actin sequestriert, dessen Verfügbarkeit reguliert und dadurch das Zytoskelett-Remodeling, Veränderungen der Zellform und die Zellmotilität beeinflusst. Durch die Modulation der Actin-Dynamik kann Tβ-4 (Y-chromosomal) Prozesse der Zellmigration, Adhäsion und Stressantworten beeinflussen und in Signalwege eingreifen, die von einem schnellen Actin-Umsatz abhängen. Als Y-chromosomal verknüpftes Paralog innerhalb der Thymosin-beta-Familie ist es relevant für Studien zur geschlechtsbiasierten Genregulation und zur männlich-spezifischen Biologie, einschließlich Kontexten, in denen ein verändertes Zytoskelettverhalten zu krankheitsassoziierten Phänotypen beiträgt.
Tβ-4 Y-linked Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TMSB4Y-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TMSB4Y abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TMSB4Y-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TMSB4Y-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.