Tβ-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422497
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Tβ-4 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Tβ-4, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Tβ-4 Anticuerpo (4H7): sc-293251
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Tβ-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422497 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Tmsb4x codifica la timosina β-4 (Tβ-4), un péptido secuestrador de actina altamente conservado que regula la disponibilidad de G-actina y favorece la remodelación dinámica del citoesqueleto. En células de ratón, la Tβ-4 influye en procesos como la migración celular, la adhesión, la motilidad asociada a heridas y la organización del citoesqueleto mediante la modulación de la polimerización de actina y de señales posteriores vinculadas a la adhesión focal y a las vías de las GTPasas de la familia Rho. Al moldear el tráfico dependiente de actina y las respuestas celulares al estrés, Tmsb4x se ha estudiado en contextos como la inflamación, la remodelación tisular, los programas angiogénicos y la progresión fibrótica. La desregulación de la dinámica de la actina asociada a una actividad alterada de la Tβ-4 puede afectar fenotipos proliferativos y migratorios relevantes para la biología del cáncer y la función de las células inmunitarias.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Tβ-4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tmsb4x en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tmsb4x junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tmsb4x tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Tβ-4.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tmsb4x para la investigación de la señalización de Tβ-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Tmsb4x críticos para la función de Tβ-4
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tmsb4x para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Tβ-4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Tβ-4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tmsb4x. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Tβ-4 (m) y el plásmido HDR Tβ-4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tmsb4x para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tmsb4x definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.