Tβ-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407294

Übersicht

TMSB10 kodiert Thymosin beta-10 (Tβ-10), ein kleines, Aktin sequestrierendes Protein, das die Verfügbarkeit von G‑Aktin reguliert und dadurch die Dynamik von Aktinfilamenten, die Zellform und die Zellbeweglichkeit beeinflusst. Durch die Modulation des zytoskelettalen Umbaus wirkt Tβ-10 auf Prozesse wie Zellzyklusprogression, Adhäsion und Stressantworten ein, mit nachgelagerten Effekten auf Signalnetzwerke, die mit Migration und Überleben verknüpft sind. Eine veränderte TMSB10-Expression wurde in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, darunter in der Krebsbiologie und bei entzündlichen Zuständen, in denen Veränderungen der Aktinorganisation zu Invasion, angiogeneseassoziierten Phänotypen und Gewebeumbau beitragen können. Daher wird TMSB10 häufig in Signalwegen untersucht, die die Regulation des Zytoskeletts mit Transkriptionsprogrammen und Zellzustandsübergängen verbinden.

Das Tβ-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TMSB10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TMSB10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TMSB10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Tβ-10-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TMSB10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Tβ-10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TMSB10-Exone abzielen, die für die Tβ-10-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TMSB10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Tβ-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Tβ-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TMSB10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Tβ-10 HDR-Plasmid (h) und Tβ-10 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TMSB10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TMSB10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.