Syne-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402804

Übersicht

SYNE1 kodiert Syne-1 (Nesprin-1), ein großes Gerüstprotein des LINC-Komplexes mit Spektrin-Wiederholungen, das den Zellkern über Interaktionen mit SUN-Proteinen, Aktin und Intermediärfilamenten mit dem Zytoskelett koppelt. Durch die Regulation der Kernpositionierung, der Mechanotransduktion und der Organisation des Zytoskeletts beeinflusst Syne-1 Prozesse wie Zellmigration, Polarität und Gewebearchitektur. Störungen von SYNE1 wurden mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter autosomal-rezessive zerebelläre Ataxie, und wurden zudem in krebsgenomischen Studien beschrieben, in denen eine veränderte Kopplung zwischen Zellkern und Zytoskelett die Genomstabilität und das Zellverhalten beeinflussen kann. Diese Eigenschaften machen SYNE1 zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung der Biologie der Kernhülle, der Kraftübertragung und krankheitsassoziierter zellulärer Phänotypen in humanen Modellsystemen.

Das Syne-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SYNE1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SYNE1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SYNE1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Syne-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SYNE1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Syne-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SYNE1-Exone abzielen, die für die Syne-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SYNE1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Syne-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Syne-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SYNE1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Syne-1 HDR-Plasmid (h) und Syne-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SYNE1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SYNE1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.