Superoxide Dismutase 1/SOD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423069

Übersicht

Sod1 kodiert die zytosolische Cu/Zn-Superoxiddismutase SOD1, ein zentrales antioxidatives Enzym, das Superoxid-Anionen in Wasserstoffperoxid und Sauerstoff umwandelt, um oxidativen Schaden zu begrenzen. Durch die Regulierung der zellulären Redoxhomöostase beeinflusst SOD1 die mitochondriale Funktion, die Proteinhomöostase (Protein-Qualitätskontrolle) sowie stressantwortliche Signalwege, einschließlich NRF2-vermittelter antioxidativer Programme. Eine Störung der SOD1-Aktivität verändert die Anfälligkeit für oxidativen Stress, Neuroinflammation und Proteotoxizität, und eine SOD1-Dysfunktion wird häufig als mechanistischer Ansatzpunkt genutzt, um Neurodegeneration und damit verbundene Motoneuron-Phänotypen zu untersuchen. In Mausmodellen dient Sod1 als gut handhabbares Modellsystem, um die Verarbeitung reaktiver Sauerstoffspezies mit Stoffwechsel, altersassoziierter Gewebeschädigung und redoxsensitiver transkriptioneller Regulation zu verknüpfen.

Das Superoxide Dismutase 1/SOD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sod1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sod1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sod1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Superoxide Dismutase 1/SOD1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sod1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Superoxide Dismutase 1/SOD1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sod1-Exone abzielen, die für die Superoxide Dismutase 1/SOD1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sod1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Superoxide Dismutase 1/SOD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Superoxide Dismutase 1/SOD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sod1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Superoxide Dismutase 1/SOD1 HDR-Plasmid (m) und Superoxide Dismutase 1/SOD1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sod1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sod1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.