SUMF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406543

Übersicht

SUMF1 kodiert das Formylglycin-generierende Enzym (FGE), eine Oxidase im Lumen des endoplasmatischen Retikulums, die für die posttranslationale Aktivierung aller Sulfatasen erforderlich ist, indem sie ein konserviertes Cystein in Cα‑Formylglycin umwandelt. Diese Modifikation ist essenziell für die Hydrolyse von Sulfatestern in Lysosomen und im Extrazellulärraum und verknüpft SUMF1 mit dem Umsatz von Glykosaminoglykanen, dem Sphingolipidstoffwechsel sowie allgemeineren lysosomenabhängigen katabolen Signalwegen. Eine Störung von SUMF1 vermindert die Sulfataseaktivität insgesamt und kann zu lysosomalen Speicherphänotypen führen, die durch eine beeinträchtigte Substratbeseitigung und eine veränderte zelluläre Homöostase gekennzeichnet sind. SUMF1 wird daher häufig im Kontext der Sulfatase-Biologie, der Lysosomenfunktion und der Mechanismen untersucht, die der Pathogenese im Zusammenhang mit dem multiplen Sulfatase-Defekt zugrunde liegen.

Das SUMF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SUMF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SUMF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SUMF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SUMF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SUMF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SUMF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SUMF1-Exone abzielen, die für die SUMF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SUMF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SUMF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SUMF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SUMF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SUMF1 HDR-Plasmid (h) und SUMF1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SUMF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SUMF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.