Plásmido CRISPR de Activación (h) SULT1A3/1A4: sc-417169-ACT

SULT1A4 codifica una sulfotransferasa citosólica que, junto con la isoforma altamente homóloga SULT1A3, cataliza la conjugación con sulfato de catecolaminas y otros sustratos fenólicos, aumentando su solubilidad y modulando su biodisponibilidad. La actividad de SULT1A3/1A4 se integra en el metabolismo de xenobióticos de fase II y en la homeostasis de neurotransmisores, modelando las respuestas celulares al estrés oxidativo y a la exposición a compuestos químicos. En tejidos con alta recambio de catecolaminas, una expresión alterada puede influir en el manejo de monoaminas y en la señalización aguas abajo, y con frecuencia se examina en el contexto de las diferencias interindividuales en el metabolismo de fármacos y la sensibilidad a agentes químicos. Dado que SULT1A3 y SULT1A4 comparten similitud de secuencia y perfiles de sustrato solapados, este locus también se utiliza para estudiar la regulación específica de isoformas y la compensación dentro de las vías de sulfatación.

SULT1A3/1A4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SULT1A4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SULT1A3/1A4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SULT1A4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SULT1A4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SULT1A3/1A4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SULT1A4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SULT1A3/1A4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SULT1A3/1A4 en células tumorales con expresión de SULT1A4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.