Sulf-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403277

Panoramica

SULF2 codifica Sulf-2, un’endosolfatasi extracellulare che rimuove selettivamente i gruppi solfato in posizione 6-O dai proteoglicani eparan solfato, rimodellando così il “codice” di solfatazione che controlla la disponibilità dei ligandi e l’interazione con i recettori. Modificando l’eparan solfato sulla superficie cellulare e nella matrice pericellulare, Sulf-2 modula gli output di segnalazione di vie quali FGF, WNT e VEGF, influenzando proliferazione, migrazione, differenziamento e adesione cellulare. Alterazioni dell’espressione di SULF2 e del rimodellamento dell’eparan solfato sono state associate alla regolazione del microambiente tumorale, al comportamento invasivo e alle risposte angiogeniche, oltre a risultare rilevanti anche in processi fibrotici e infiammatori. Queste funzioni rendono SULF2 un bersaglio utile per analizzare la segnalazione dipendente dalla matrice extracellulare e la regolazione della comunicazione cellulare mediata dai glicosaminoglicani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sulf-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SULF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SULF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SULF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sulf-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SULF2 per lo studio della segnalazione di Sulf-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SULF2 critici per la funzione di Sulf-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SULF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Sulf-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Sulf-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SULF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Sulf-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Sulf-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SULF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SULF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.