SUCLA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423214

Übersicht

Sucla2 kodiert die murine Beta‑Untereinheit der Succinyl‑CoA‑Synthetase (ADP‑bildend) SUCLA2, ein Enzym der mitochondrialen Matrix, das im Tricarbonsäurezyklus (TCA‑Zyklus) die reversible Umwandlung von Succinyl‑CoA zu Succinat unter ATP‑Bildung katalysiert. Über diese Reaktion unterstützt SUCLA2 den oxidativen Stoffwechsel, anaplerotische Flüsse sowie die Koordination zwischen dem TCA‑Zyklus und der Nutzung von Succinyl‑CoA im Zusammenhang mit Häm‑ bzw. Ketonkörper‑Stoffwechsel. Die SUCLA2‑Funktion ist eng mit der mitochondrialen Energiehomöostase und dem Nukleotidgleichgewicht verknüpft; Störungen dieses Signalwegs werden mit mitochondrialen Enzephalomyopathie‑Phänotypen und Defekten der mtDNA‑Aufrechterhaltung in Verbindung gebracht, wie sie für SUCLA2‑assoziierte mitochondriale Erkrankungen beschrieben sind. In Mausmodellen ist Sucla2 daher relevant für die Untersuchung von Stoffwechsel‑Stressantworten, neuromuskulärer Vulnerabilität und Mechanismen, die TCA‑Zyklus‑Enzyme mit der Stabilität des mitochondrialen Genoms verbinden.

Das SUCLA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sucla2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sucla2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sucla2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SUCLA2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sucla2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SUCLA2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sucla2-Exone abzielen, die für die SUCLA2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sucla2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SUCLA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SUCLA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sucla2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SUCLA2 HDR-Plasmid (m) und SUCLA2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sucla2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sucla2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.