Plasmide CRISPR/Cas9 KO STK32A (h): sc-408625

Présentation

STK32A code une protéine kinase sérine/thréonine impliquée dans le contrôle, dépendant de la phosphorylation, de la signalisation cellulaire, avec des rôles putatifs dans la régulation de la croissance cellulaire, de la différenciation et de processus associés au cytosquelette. En tant que membre d’une famille de kinases, STK32A est en mesure d’influencer des cascades de kinases qui façonnent les programmes transcriptionnels et les sorties de signalisation en réponse au stress. Une activité kinase ou une expression altérée est fréquemment liée à une prolifération dérégulée et à un remodelage de voies spécifique au contexte dans le cancer et d’autres maladies complexes, ce qui rend STK32A pertinente pour des études mécanistiques. La caractérisation des réseaux de phosphorylation dépendants de STK32A peut clarifier comment la connectivité de signalisation varie selon les états cellulaires et les modèles de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO STK32A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène STK32A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du STK32A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert STK32A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine STK32A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en STK32A pour l'étude de la signalisation de STK32A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de STK32A essentiels à la fonction de STK32A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de STK32A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le STK32A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le STK32A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus STK32A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le STK32A plasmide HDR (h) et le STK32A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie STK32A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles STK32A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.