STC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401423-ACT

STC1 (stanniocalcina 1) codifica un ormone glicoproteico secreto implicato nell’omeostasi di calcio e fosfato e, più in generale, nella regolazione delle risposte cellulari allo stress. Nelle cellule umane, STC1 influenza la funzione mitocondriale, la tolleranza allo stress ossidativo, la segnalazione associata all’infiammazione e i programmi angiogenici, con collegamenti riportati alle reti trascrizionali responsivi all’ipossia. Un’espressione alterata di STC1 è stata associata alla biologia tumorale, al danno ischemico e a fenotipi metabolici e fibrotici, rendendolo un nodo utile per lo studio dell’adattamento al microambiente. Queste funzioni collocano STC1 come modulatore della sopravvivenza cellulare, della migrazione e della comunicazione paracrina in molteplici contesti tissutali.

STC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

STC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di STC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da STC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via STC1 nelle cellule tumorali con espressione di STC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.