SRY CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404342-ACT

SRY（sex-determining region Y）は、高移動度群（HMG）ボックス型の転写因子をコードしており、胚発生期にセルトリ細胞の分化と精巣形成を誘導することで、雄の性決定を開始する。SRYはDNAに結合してこれを湾曲させ、遺伝子発現プログラムを制御する。特にSOX9を強力に活性化し、生殖路の発達を形作る下流の性腺分化経路を協調的に統括する。SRYの発現異常や配列変異は、性腺形成不全や性転換表現型などを含む性分化疾患（DSD）と関連し、また多様な実験系において系統特異的・性特異的マーカーとしても利用されている。SRYはマスター制御因子として機能するため、その活性を調節することは、細胞運命決定を制御する転写ネットワークを直接検証するための有力な手段となる。

SRY CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SRYの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SRY CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SRY 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSRY転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SRYの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSRY遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSRY依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSRY発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSRY経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。