SREBP-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400094-NIC

Il gene umano **SREBF1** codifica la **proteina 1 legante l'elemento regolatore degli steroli** (**SREBP-1**), un fattore di trascrizione ancorato alla membrana che viene attivato proteoliticamente in risposta allo stato lipidico e successivamente trasloca nel nucleo per indurre l'espressione di geni lipogenici. SREBP-1 coordina i programmi di biosintesi di acidi grassi e trigliceridi regolando enzimi quali **ACLY, ACACA, FASN e SCD**, integrando segnali provenienti dall'insulina, da **mTORC1** e dalle vie di sensing dei nutrienti. Attraverso il controllo dell'omeostasi lipidica, SREBP-1 influenza la biogenesi delle membrane, le risposte allo stress del reticolo endoplasmatico (ER) e la riprogrammazione metabolica durante proliferazione e differenziamento. Un'attività deregolata di **SREBF1/SREBP-1** è stata associata a disfunzioni metaboliche e a fenotipi di accumulo lipidico, ed è frequentemente studiata in contesti di lipogenesi alterata in modelli di cancro e di malattia epatica.

SREBP-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SREBF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SREBF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SREBF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SREBF1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.