SREBP-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400094-ACT

SREBF1 kodiert das Sterol-regulatorische Element-bindende Protein 1 (SREBP-1), einen membrangebundenen Transkriptionsfaktor, der durch proteolytische Prozessierung aktiviert wird und die Homöostase von Lipiden und Cholesterin steuert. Aktives SREBP-1 koordiniert die Expression von Genen, die an der de-novo-Lipogenese und der Fettsäure-Desaturierung beteiligt sind, und verknüpft dabei Nährstoff- und Insulinsignale mit dem ER-zu-Golgi-Transport sowie mit ER-Stressantworten. Dieser Signalweg prägt die Membranbiogenese und Energiespeicherung und wird bei Stoffwechselerkrankungen und lipidgetriebener Entzündung häufig umprogrammiert. Eine veränderte SREBF1/SREBP-1-Aktivität wurde zudem mit onkogener metabolischer Reprogrammierung und Veränderungen zellulärer Differenzierungsprogramme in Verbindung gebracht.

SREBP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SREBF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SREBP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SREBF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SREBF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SREBP-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SREBF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SREBP-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SREBP-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SREBF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.