SPT16 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401268-ACT

Das humane SUPT16H-Gen kodiert SPT16, eine zentrale Untereinheit des Histon-Chaperon-Komplexes FACT (Facilitates Chromatin Transcription), der Nukleosomen reorganisiert, um die Elongation durch RNA-Polymerase II zu unterstützen. Durch die Koordination der H2A–H2B-Dynamik und der Chromatinzugänglichkeit trägt SPT16 zur Regulation von Transkriptionsprogrammen, der replikationsgekoppelten Chromatin-Remodellierung und der DNA-Schadensantwort bei. Die FACT-abhängige Chromatinkontrolle verknüpft SUPT16H mit proliferativen Signalnetzwerken und Wegen der Genomstabilität und macht es damit relevant für die Untersuchung epigenetischer Regulation sowie von Mechanismen, die zu onkogener Transkription und Stressanpassung beitragen. Eine veränderte FACT-Aktivität wurde mit fehlregulierter Genexpression und veränderten Chromatinzuständen in verschiedenen krebsbezogenen Kontexten in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als funktionellen Knotenpunkt in der Chromatin- und Transkriptionsforschung stützt.

SPT16 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SUPT16H-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SPT16 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SUPT16H-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SUPT16H-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SPT16-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SUPT16H-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SPT16-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SPT16-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SUPT16H-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.