Plásmido CRISPR de Activación (h) SPRR2G: sc-416907-ACT

SPRR2G (proteína pequeña rica en prolina 2G) es un precursor de la envoltura córnea que se expresa predominantemente en epitelios estratificados, donde contribuye a la formación de la barrera al servir como sustrato para el entrecruzamiento mediado por transglutaminasa durante la diferenciación terminal de los queratinocitos. Funciona dentro de los programas de diferenciación epidérmica y queratinización coordinados con la remodelación del citoesqueleto y redes de genes epiteliales sensibles al estrés. La expresión alterada de miembros de la familia SPRR se observa con frecuencia en afecciones cutáneas inflamatorias que comprometen la barrera y en la hiperproliferación epitelial, y SPRR2G se ha utilizado como lectura molecular del estado de diferenciación y de la remodelación tisular. Estas características hacen que SPRR2G sea relevante para estudiar la homeostasis epitelial, las respuestas a lesiones y los cambios asociados a enfermedad en las vías de diferenciación.

SPRR2G El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SPRR2G sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SPRR2G El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SPRR2G en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SPRR2G, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SPRR2G. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SPRR2G y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SPRR2G en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SPRR2G en células tumorales con expresión de SPRR2G silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.