SPRED1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402981

Descripción general

SPRED1 (proteína 1 que contiene un dominio EVH1 relacionado con Sprouty) es un regulador negativo de la señalización de los receptores tirosina quinasa que restringe la cascada Ras–RAF–MEK–ERK/MAPK al acoplarse al complejo Ras-GAP de neurofibromina (NF1). Al limitar la activación de ERK dependiente de factores de crecimiento, SPRED1 influye en la proliferación, diferenciación y migración celular en múltiples contextos tisulares. Las variantes con pérdida de función en SPRED1 se asocian con el síndrome de Legius y con alteraciones de la pigmentación y rasgos del neurodesarrollo, y la reducción de la actividad de SPRED1 puede afectar la amplitud de la vía MAPK en redes de señalización relevantes para el cáncer. Por ello, SPRED1 se estudia ampliamente en modelos de biología de las rasopatías, programas transcripcionales impulsados por ERK y control por retroalimentación de la señalización mitogénica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SPRED1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SPRED1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SPRED1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SPRED1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SPRED1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SPRED1 para la investigación de la señalización de SPRED1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SPRED1 críticos para la función de SPRED1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SPRED1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SPRED1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SPRED1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SPRED1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SPRED1 (h) y el plásmido HDR SPRED1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SPRED1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SPRED1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.