Plásmido Doble Nickase (m) SPATA2: sc-435216-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)SPATA2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SPATA2 (m) y el plásmido de doble nickasa SPATA2 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Spata2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SPATA2 Anticuerpo (EE-31): sc-100946
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) SPATA2 | sc-435216-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) SPATA2 | sc-435216-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino **Spata2** codifica **SPATA2**, una proteína adaptadora citoplasmática que coordina la señalización dependiente de ubiquitina y regula vías inflamatorias y de respuesta al estrés. SPATA2 se asocia con el complejo desubiquitinasa **CYLD** y se ha vinculado con la modulación de la señalización de **NF-κB** y **MAPK** aguas abajo de señales mediadas por receptores, influyendo en la supervivencia celular, la apoptosis y las respuestas inmunitarias innatas. Aunque inicialmente se caracterizó en el contexto de la espermatogénesis, SPATA2 es relevante de forma amplia para la homeostasis celular y la proteostasis mediante el control de la edición de cadenas de ubiquitina. La desregulación de componentes del eje SPATA2–CYLD se estudia con frecuencia en modelos de inflamación, disfunción de la barrera epitelial y señalización asociada a tumores, sin que ello implique resultados clínicos.
SPATA2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Spata2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Spata2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Spata2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Spata2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.