Plasmide Double Nickase (h) Spartin: sc-407769-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Spartin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Spartin Double Nickase (h) et le plasmide Spartin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SPG20. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Spartin Antibody (D-4): sc-271888
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Spartin | sc-407769-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Spartin | sc-407769-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPG20 code pour la spartine, une protéine cytosolique impliquée dans le trafic endosomal et la dynamique membranaire grâce à ses interactions avec des composants de la machinerie ESCRT et des voies de tri dépendantes de l’ubiquitine. La spartine a été associée à la régulation du renouvellement des gouttelettes lipidiques et à l’homéostasie mitochondriale, en s’intégrant à des processus de contrôle qualité cellulaire qui influencent la protéostasie et la fonction des organites. Une altération de SPG20 est associée au syndrome de Troyer, une paraplégie spastique héréditaire compliquée caractérisée par une atteinte du neurodéveloppement et du système moteur, ce qui fait de la spartine un point d’entrée utile pour étudier des mécanismes de trafic et de réponse au stress pertinents pour les neurones. Dans des modèles cellulaires, la perturbation de SPG20 peut servir à examiner comment des modifications de l’acheminement endolysosomal et du maintien des organites affectent la signalisation et la viabilité cellulaire.
Spartin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SPG20 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SPG20. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SPG20. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SPG20.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.