Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sp1 (m): sc-423094
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Sp1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Sp1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Sp1 Antibody (1C6): sc-420
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sp1 (m) | sc-423094 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Sp1 (specificity protein 1) est un facteur de transcription à doigts de zinc exprimé de manière ubiquitaire, qui se lie à des éléments de promoteur riches en GC afin de réguler la transcription basale et induite au sein de programmes géniques variés. Dans les cellules de souris, Sp1 intègre des signaux issus des voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et de voies sensibles au stress pour coordonner la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, le remodelage de la chromatine et l’homéostasie métabolique. Par ses interactions avec des co‑régulateurs tels que p300/CBP et des complexes HDAC, Sp1 contribue à façonner la sortie transcriptionnelle de gènes impliqués dans la prolifération, l’apoptose et la différenciation. Une activité dérégulée de Sp1 a été impliquée dans des réseaux transcriptionnels oncogéniques, la signalisation inflammatoire et des changements d’expression génique associés à la neurodégénérescence, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sp1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sp1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sp1 pour l'étude de la signalisation de Sp1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Sp1 essentiels à la fonction de Sp1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Sp1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Sp1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Sp1 plasmide HDR (m) et le Sp1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.