SP-D CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422903

概要

Sftpdは、肺胞Ⅱ型細胞やクララ細胞で主に産生される分泌性コレクチンであるサーファクタントプロテインD（SP-D）をコードしており、肺サーファクタントの恒常性維持と粘膜表面における自然免疫防御に寄与します。SP-Dは微生物やアポトーシス細胞上の糖鎖パターンを認識し、レクチン依存的な相互作用を介してオプソニン化、凝集、ならびにマクロファージや好中球の活性調節を促進します。機能的には、SP-Dは肺胞のプロテオスタシス制御、炎症性サイトカインシグナル伝達、酸化ストレス応答といった経路と交差し、これらが気道バリアの完全性を規定します。Sftpd/SP-D活性の変化は、肺の炎症やリモデリングの制御異常と関連しており、マウスモデルにおける急性肺障害、喘息様・COPD様表現型、ならびに呼吸器感染への感受性の機序を研究する上で重要です。

SP-D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSftpd遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sftpd内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sftpdのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SP-Dタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SP-Dシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sftpd欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SP-Dの機能に不可欠なSftpdエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sftpdゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SP-D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSP-D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sftpd遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SP-D HDRプラスミド（m）および SP-D HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSftpdホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSftpd標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。