Plasmide CRISPR d'Activation (h) SP-D: sc-401572-ACT

Le gène humain **SFTPD** code la protéine de surfactant D (SP-D), une lectine de type C contenant du collagène (collectine), principalement sécrétée par les cellules alvéolaires de type II et l’épithélium des voies aériennes. Elle se lie aux glycanes associés aux agents pathogènes et aux dommages afin de favoriser l’opsonisation et l’agglutination. SP-D module la signalisation de l’immunité innée en influençant des processus liés au complément et en régulant le tonus inflammatoire dans le poumon, notamment via des effets sur l’activation des macrophages et la production de cytokines. Par ces activités, elle contribue à l’homéostasie du surfactant et à la défense des muqueuses à l’interface air–liquide. Une expression altérée de **SFTPD** ou une fonction perturbée de SP-D ont été associées à une inflammation pulmonaire dérégulée et à une susceptibilité accrue à des phénotypes de maladies respiratoires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles des voies aériennes et des alvéoles.

SP-D Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SFTPD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SP-D Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SFTPD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SFTPD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SP-D. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SFTPD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SP-D au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SP-D dans les cellules tumorales présentant une expression de SFTPD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.