SP-B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401992-ACT

Humanes **SFTPB** kodiert das Surfactant-Protein B (SP-B), ein hydrophobes Peptid, das für die Funktion des pulmonalen Surfactants und die Stabilität der Alveolen essenziell ist. SP-B unterstützt die Adsorption und Ausbreitung von Phospholipiden an der Luft–Flüssigkeits-Grenzfläche, fördert dadurch eine niedrige Oberflächenspannung und einen effizienten Gasaustausch und ist an der Surfactant-Metabolisierung in Lamellenkörperchen sowie am sekretorischen Transport in Alveolarzellen vom Typ II beteiligt. Eine veränderte Expression oder Prozessierung von SFTPB wird mit einer gestörten Surfactant-Homöostase, epithelialen Stressantworten und beeinträchtigter Lungenmechanik bei Erkrankungen mit respiratorischer Insuffizienz in Verbindung gebracht. Als lungenangereicherter Faktor wird SP-B häufig in Signalwegen untersucht, die die epitheliale Differenzierung, den Lipidhaushalt und die angeborene Barrierefunktion steuern.

SP-B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SFTPB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SP-B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SFTPB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SFTPB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SP-B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SFTPB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SP-B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SP-B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SFTPB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.