SNFT Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403344-ACT

BATF3 codifica um fator de transcrição do tipo “basic leucine zipper” que regula programas de expressão gênica ligados à especificação de linhagens imunológicas e à transcrição responsiva a estímulos. Em células humanas, BATF3 participa de redes transcricionais a jusante da sinalização por citocinas e por receptores de reconhecimento de padrões, influenciando o processamento/apresentação de antígenos, respostas associadas a interferon e vias inflamatórias mais amplas. A perturbação de programas dependentes de BATF3 tem sido associada a alterações na vigilância imune e a estados inflamatórios desregulados, tornando-o relevante para estudos de interações tumor–sistema imune e de imunopatologia relacionada a infecções. Como regulador transcricional, BATF3 é comumente investigado por seus efeitos em decisões de destino celular, regulação gênica associada à cromatina e respostas dependentes do contexto a sinais do microambiente.

SNFT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BATF3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SNFT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BATF3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BATF3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SNFT. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BATF3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SNFT no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SNFT em células tumorais com expressão de BATF3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.