Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SNARK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405079
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SNARK Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SNARK, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SNARK Antibody (C-12): sc-374348
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SNARK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405079 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
NUAK2 codifica SNARK (SNF1/AMPK-related kinase), una chinasi serina/treonina della famiglia delle chinasi correlate ad AMPK che collega lo stato energetico cellulare a programmi di segnalazione adattativi. SNARK viene attivata a valle di LKB1/STK11 e partecipa a reti di fosforilazione che influenzano il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione e la migrazione cellulare, nonché la regolazione metabolica in risposta allo stress. Le funzioni riportate collegano NUAK2 a vie che governano la transizione epitelio-mesenchimale, gli output trascrizionali associati a Hippo/YAP e il controllo, dipendente dal contesto, di proliferazione e sopravvivenza. Un’attività deregolata di NUAK2/SNARK è stata associata alla biologia del cancro e a fenotipi invasivi, supportandone l’impiego come bersaglio per studi meccanicistici sull’accoppiamento tra metabolismo e motilità.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SNARK (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NUAK2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NUAK2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NUAK2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SNARK.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NUAK2 per lo studio della segnalazione di SNARK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni NUAK2 critici per la funzione di SNARK
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NUAK2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SNARK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SNARK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NUAK2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SNARK Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SNARK (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NUAK2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NUAK2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.