Plasmide CRISPR d'Activation (h) SNAP 23: sc-417781-ACT

SNAP23 code la protéine 23 associée aux synaptosomes, une Qbc-SNARE qui s’associe aux syntaxines et aux membres de la famille VAMP pour catalyser les événements de fusion membranaire requis pour l’exocytose régulée et constitutive. SNAP23 favorise l’arrimage et le trafic des vésicules à la membrane plasmique, influençant la sécrétion, le recyclage endocytique et la translocation de GLUT4 dans les cellules sensibles à l’insuline. En contrôlant la fusion des granules et des vésicules, elle contribue à la dégranulation des cellules immunitaires et à la libération de cytokines, et sa dérégulation a été associée à des modifications de la signalisation inflammatoire et à des phénotypes métaboliques pertinents pour la recherche sur le diabète et l’obésité. SNAP23 interfère également avec des voies qui régissent la dynamique des membranes et la disponibilité des récepteurs de surface cellulaire, reliant le trafic vésiculaire aux réponses de signalisation dans divers types de cellules humaines.

SNAP 23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNAP23 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SNAP 23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNAP23 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNAP23, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SNAP 23. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNAP23 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SNAP 23 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SNAP 23 dans les cellules tumorales présentant une expression de SNAP23 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.